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        • Líneas Celulares para Investigación en Alzheimer (HCS)

Ensayo de Procesamiento del APP

Referencia: P30701


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Ficha del Producto

La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por la existencia de deposiciones del péptido beta miloide (bA) en el cerebro. El péptido bA es producto de la digestión de la proteína precursora de Amiloide (APP). Innoprot ha desarrollado un nuevo ensayo basado en fluorescencia para evaluar nuevos inhibidores de este proceso, poniendo a disposición de sus clientes la línea celular completamente validada para la realización de sus campañas de High-Content-Screening.

Bases del Ensayo


Se ha clonado el cDNA correspondiente a la APPwt y un mutante de APP truncado junto con la tGFP. Se ha confirmado que el APP wt, APP-tGFP y un mutante truncado de APP-tGFP dispuestos en la misma localización celular. Después de generar clones de expresión estable para el mutante truncado fluorescente de APP en la línea celular MDCK, se seleccionó uno con un patrón de expresión baja, que presentaba un fenotipo de fluorescencia citosólica. Tras la inhibición de la actividad b-secretasa o de la g-secretasa, el proceso de secreción se bloquea y las células MDCK adoptan un patrón de fluorescencia vesicular.

Detalle del Ensayo


Este ensayo permite monitorizar el proceso proteolítico endógeno de las secretasas en espacio y tiempo, utilizando diferentes compuestos inhibitorios que bloqueen la actividad g-secretasa, beta-secretasa o siRNA BACE dismuniyendo el procesamiento. La realización de este ensayo tipo “High Content” sobre la actividad b y g-secretasa se lleva a cabo utilizando un sistema automatizado de imagen epifluorescente que adquiere y cuantifica las vesículas fluorescentes en el citoplasma. Los resultados se comparan con los obtenidos utilizando compuestos de referencia que permiten monitorizar el proceso de enfermedad mediante un screening multiparamétrico sobre los compuestos a evaluar.

Aplicaciones

  • "High Content Screening" sobre la actividad b y g-secretasa

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